1.项目简介 大规模连续流悬浮培养和纯化技术在口蹄疫疫苗生产中的应用与创新项目是由杨凌金海生物技术有限公司（以下简称"杨凌金海"）负责承担，项目最初由国家农业部批准，由上海海利生物技术股份有限公司（以下简称"海利生物"）出资新建，利用阿根廷一家公司先进的高度纯化悬浮培养技术生产口蹄疫疫苗。

杨凌金海建成以后，在充分利用原有的细胞悬浮培养技术、抗原浓缩纯化技术以及疫苗乳化技术的基础上，结合国内国际先进技术和经验，进一步改进提升现有的技术和设备，形成一整套更加先进、更加高效、更高质量、更加安全的口蹄疫疫苗生产质控和生物安全控制体系，也培养出一支专业技术队伍。

项目的建成投产和技术的改进创新的成功应用，填补了省内多项空白。

2017年至2021年期间，利用大规模连续流细胞悬浮培养技术、抗原浓缩纯化技术以及疫苗乳化技术成功生产了猪口蹄疫O型灭活疫苗(O/Mya98/XJ/2010株+O/GX/09-7株)、口蹄疫O型、A型、亚洲1型三价灭活疫苗(OHM/02株+AKT-Ⅲ株+Asia1KZ/03株)、口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗(OHM/02株+AKT-Ⅲ株)和猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗 (OHM/02株+AKT-Ⅲ株)共计四种口蹄疫疫苗，每一种疫苗均经过小批量试生产到最终的规模化生产。

利用大规模连续流细胞悬浮培养技术培养BHK-21细胞，细胞培养完成后接种口蹄疫病毒，经悬浮培养后收获口蹄疫病毒液进行灭活，再将灭活后的口蹄疫病毒液经过高倍浓缩纯化技术进行处理，去掉细胞碎片、杂蛋白、内毒素和多余水分，获得高浓缩倍数高纯度的口蹄疫疫苗抗原，经过无菌检验、安全性检验、内毒素检验以及抗原含量检验合格后，用专门配方的疫苗缓冲系统将浓缩抗原稀释至疫苗配制所需要的含量，再与疫苗佐剂进行混合并经过特定的乳化设备进行乳化，乳化过程严格控制温度、搅拌速度和混合速度、乳化设备参数等，最终制备成散装疫苗，经过对散装疫苗黏度、粒径分布、滴水试验、离心试验等检测合格后灌装到疫苗瓶内，贴标装箱形成成品疫苗。

针对每种疫苗都先试生产三批，经检验合格后将产品及相关资料报送农业农村部畜牧兽医局申请产品批准文号，最终经过农业农村部畜牧兽医局材料审核和产品复核检验合格后，每种口蹄疫疫苗产品都获得产品批准文号，其中猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗 (OHM/02株+AKT-Ⅲ株)获得农业农村部颁发的三类新兽药证书。

2020年12月30日，杨凌金海获得中国合格评定国家认可委员会对公司检测中心的CNAS证书，标志着公司质控检测能力达到国际先进水平。

利用大规模连续流细胞悬浮培养和抗原浓缩纯化及疫苗乳化技术生产的口蹄疫疫苗经过区域试验和评价后，从2017年下半年陆续上市销售，目前产品已经销往全国20多个省市及规模化养殖场，免疫效果和安全性等都得到市场和用户的一致认可。

大规模连续流细胞悬浮培养和抗原浓缩纯化及疫苗乳化技术在口蹄疫疫苗生产中的应用与创新不仅体现在生产工艺的先进性和产品质量高标准等多个方面，同时在产品品种和生物技术以及生产规模、生物安全等级方面填补了省内空白，在兽药GMP（2020年修订）实施方面走到省内前列。

2.项目的主要创新点 （1）大规模连续流细胞悬浮培养技术在杨凌金海口蹄疫疫苗生产中应用和创新，比原来传统的批次式细胞悬浮培养工艺技术优势明显，单批培养体积达5000升，培养时间仅需不足24h，传统的批次式培养时间需要72h或更长时间，体积2000-3000升；细胞活力、细胞密度等质量指标良好，可获得高浓度的口蹄疫病毒液，生产效率更高、质量更好。

（2）浓缩纯化技术在抗原生产中的应用，可更大限度去除细胞碎片及杂蛋白、内毒素等无关产物，保证抗原的纯度更高，同时先进高效的浓缩纯化工艺技术比原来传统的浓缩纯化技术效率更高、回收率更高，抗原回收率可提高25-30%，特有的工艺及缓冲系统可以保证有效抗原146S的完整性，在长达12个月的保存期内抗原有效含量不降解，该技术的应用降低了生产成本，提高了生产效率，保证了产品质量。

（3）独特的疫苗乳化技术在疫苗配制过程中的应用保证了每一批疫苗（单批乳化量可达2000万毫升）粒径90%以上在0.055μm左右成正态分布，这是疫苗质量稳定的一个很直观的评价指标，其中猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗（OHM/02+AKT-III株）在有效期达18个月后，在24个月时检测疫苗抗原含量及粒径等理化指标均稳定不降解。

是目前口蹄疫疫苗中有效期最长的疫苗。

其他品牌的口蹄疫疫苗粒径偏大而且分布不均，表明疫苗的理化性状不稳定，疫苗容易分层，免疫效果会受到一定影响。

（4）该技术应用期间申请并获得多项专利技术和产品批准文号以及三类新兽药证书。

（5）应用该技术生产的口蹄疫疫苗产品在陕西省内均属首次，技术和产品以及生物安全级别等创新内容填补了省内空白。