一、任务来源      本项目系陕西省科技厅2009年陕西省科学技术研究发展计划项目，经陕西省科技厅批准立项，课题名称《CTGF、TGF-β通过cAMP/PKA信号通路参与促硬皮病皮肤纤维化作用的实验研究》，课题编号为2009k01-82；2009年陕西省中医药管理局批准立项，课题名称《热敷药治疗硬皮病的临床及实验研究》项目编号：jc-98；2011年陕西省中医药管理局重点项目，课题名称《中医外治法治疗局限性硬皮病的临床研究》项目编号：lc34。项目负责人均为闫小宁副主任医师。      二、技术应用领域和技术原理      硬皮病是一种以皮肤及内脏器官纤维化或硬化,最后发展至萎缩为特点的结缔组织病。硬皮病的发病率居结缔组织病的第3位，保守的估计目前有100-300万患者，由于疾病皮肤肿胀、硬化、萎缩而损容或者致残丧失劳动能力，给患者带来巨大的身心痛苦，也给社会带来巨大的经济负担。长期以来，由于该病的发病机理不清楚，影响了临床治疗的效果，使其成为危害人类健康的顽疾。陕西省中医医院皮肤科是国家临床重点专科，国家中医药管理局"十二五"重点专科，陕西省中医药管理局重点学科，硬皮病为本科室重点攻关病种。在陕西省科技厅及陕西省中医药管理局科学研究项目的支持下，我们瞄准这一世界性医学难题，针对硬皮病的皮肤纤维化过程中cAMP/PKA信号通路的异常活化情况，构建真核表达载体，观察硬皮病患者皮损培养的成纤维细胞凋亡的影响。同时通过临床研究和动物实验观察中药经典外用方剂"热敷药"治疗硬皮病抗纤化的疗效及采用针灸围刺法、艾灸、中药"热敷药"热敷等中医外治方法治疗局限型硬皮病的临床疗效，探讨改善硬皮病症状的机理，为中医外治硬皮病的理论及实践的进一步发展奠定基础，为临床推广使用提供理论根据。本项目性质为西医基础研究及中医药学基础及临床研究。由闫小宁、张建荣、田庆、李文彬、李美红、韩世荣等多人组成课题组研究小组完成。整个课题的研究工作进展顺利，已按照课题计划完成全部研究内容。      三、性能指标       1、课题设计要求的主要性能指标：根据课题计划书的设计，研究分为两部分，第一部分为基础研究部分，着重对cAMP/PKA信号通路对硬皮病纤维化过程影响的研究。第二部分为"热敷药"药物组成动物及临床试验及针灸围刺法、艾灸、中药"热敷药"热敷治疗体系的中医临床研究。      ①基础研究(cAMP/PKA信号通路研究)：构建CTGF、TGF-β1真核表达载体，并观察CTGF因、TGF-β1基因转染硬皮病患者皮损培养的成纤维细胞凋亡的影响；免疫组化法及实时荧光定量PCR探讨蛋白激酶A（PKA）在硬皮病患者和正常人成纤维细胞中的表达。     ②中医临床及试验研究：构建硬皮病的动物模型，以"热敷药"药糊浸泡或涂抹皮损，免疫组化技术检测各组小鼠皮肤组织Ⅰ型胶原、Ⅲ胶原蛋白表达情况。临床观察使用"热敷药"及针灸围刺、艾灸、"热敷药"外敷皮损局部，观察治疗前后硬皮病患者疗效性和安全性指标的变化情况。      本研究结束后，在国家核心期刊已发表论文7篇，其中medline收录1篇，在全国皮肤科学会年会大会发言1次，在美国举办的第四届国际临床及实验皮肤病年会大会发言1次。      四、研究成果的创造性与先进性      1.从阳离子脂质体Lipofectamine2000构建真核表达载体着手，首次通过基因转染的方法，观察CTGF、TGFB1基因转染硬皮病患者皮损培养的成纤维细胞凋亡的负调控影响，该研究具有一定先进性。      2.本研究首次通过TGF-B1和CTGF在cAMP/PKA信号通路蛋白信号转导在硬皮病中的作用PKA活性检测，提示PKA可以作为硬皮病新的治疗作用的靶点，为治疗硬皮病提供了新思路。      3.本研究进行了"热敷药"的临床观察及动物试验、药理研究、方药分析，显示该组方具有缓解硬皮病纤维化的作用。      4.本研究通过针灸围刺法、艾灸、中药热敷等中医外治治疗综合体系的建立和临床应用，对于硬皮病有良好的疗效。科技查新显示"未见该体系的三联疗法治疗硬皮病的研究报道"。     综上所述，本研究对硬皮病皮损的致病机理进行了分子生物学的研究和探讨，提出了硬皮病治疗作用的新靶点；建立了中医治疗硬皮病皮损的三联疗法，具有良好的临床疗效，已在20多家基层医院进行临床推广和使用。发表学术论文7篇，整体研究国内领先，部分达到国际先进水平。      五、推广应用的范围及存在的问题和改进意见       本研究的成果于中医、中西医结合皮肤病基础及临床领域推广应用，为提高中医药防治硬皮病的临床疗效提供了科学依据和新的思路。"热敷药"特有的药物组成及独特的外用方式对于硬皮病具有良好的治疗效果，采用针刺围刺、艾灸、"热敷药"热敷三联疗法治疗体系对于硬皮病的防治具有重要意义。通过多家县级医院区级医院的推广使用情况来看本治疗体系，治疗有效率达81.6%，对提高硬皮病患者的生活质量以及减轻社会财政负担具有重要意义，值得在临床医院特别是基层医院推广。因"热敷药"使用前需上笼屉加热，使用方法有一定的繁琐，尚需改进剂型。同时针灸具有一定的痛苦性治疗手段需要进一步优化。