1课题来源与背景   本研究属于基础研究，资金主要来自于国家自然基金委、陕西省科技计划项目。   乙型肝炎病毒（HBV）感染是严重危害全球人类健康的公共卫生问题，我国更是高流行区域。HBV母婴垂直传播是造成HBV感染慢性化的主要原因，乙肝疫苗、乙肝免疫球蛋白的广泛应用使其在HBV感染慢性化及不良结局中的作用更加凸显。大量研究证实在妊娠中后期多次应用预防免疫阻断措施取得了肯定的疗效，但仍有10%左右患者不能得到保护，且出生后接种乙肝疫苗也因免疫无反应而失败。据此推测存在妊娠更早期宫内传播的可能性，或通过卵细胞传播。多项研究证实HBV可以感染不同物种的卵细胞，但是关于人卵细胞感染HBV的研究较少，机制尚不清楚。   卵巢的结构决定了卵泡处于无血管的微环境中，卵细胞由卵巢颗粒细胞包围更是无法接触到血液，HBV通过什么途径感染卵细胞，HBV在卵细胞中是否具有复制活性，被感染的卵细胞能否正常受精并传递到胚胎，携带HBV的胚胎能否在母体内正常发育直至分娩，胚胎中的HBV基因是否具有生物学功能对后代产生一定影响。这些问题正是确定HBV经卵细胞途径传播的关键所在，但我们对此知之甚少。   2主要研究内容与成果   2.1HBV感染卵细胞及影响因素研究   2.1.1HBV感染卵细胞的研究   运用免疫组化法和原位杂交法检测卵巢组织和卵细胞中HBsAg、HBcAg、HBVDNA和HBVmRNA的存在和分布情况，最终结果说明HBV能够感染卵细胞、可在其内复制，这提示HBV感染卵细胞可能是母婴传播的一个途径。   2.1.2HBV感染卵细胞的影响因素   研究得出血清HBeAg阳性和HBVDNA高复制组（>1E+004IU/mL）的卵细胞HBcAg，HBVDNA和HBVmRNA阳性率明显高于HBeAg阴性和HBVDNA低复制组（<1E+004IU/mL），提示母亲血清中的HBVDNA水平是影响HBV经卵细胞传播的主要因素，这为母婴垂直传播临床阻断方面提供了依据。   2.2HBV经卵细胞传递至胚胎的研究   常规研究方法确证HBV经卵细胞母婴垂直传播难度大、难点多，周期长。本研究利用单细胞RT-PCR技术首次在人类早期胚胎中检测出了HBVmRNA，说明这些胚胎中的HBV具有一定的复制活性，可在一定条件下进行转录和翻译。   2.3HBV垂直传播对妊娠结局的影响   HBV基因组整合可引起染色体上整合部位遗传物质的改变。对体外受精研究人群进行随访，观察人群的优质胚胎率、临床妊娠率、流产率、新生儿畸形率及新生儿HBV感染率，完整观察HBV垂直传播的整个过程。研究结果显示HBV感染对妊娠成功率无影响，但会引起妊娠后流产率的增加。本项目进一步对体外HBV感染的胚胎与正常胚胎进行发育评估，结果显示HBV感染可以影响人早期胚胎的发育，主要表现在6细胞胚胎形成阶段。   2.4HBV体外感染卵巢颗粒细胞的研究   为探明HBV感染卵细胞的途径、初步机制，判断人体内真实的HBV感染颗粒细胞情况，本研究成功构建了体外HBV感染卵巢颗粒细胞体系，通过这种模型我们推测HBV感染患者卵巢颗粒细胞的感染情况，为进一步在体外建立人卵丘-卵母细胞复合体共同感染HBV的模型提供基础和研究平台，为后期制定相应阻断措施提供理论依据，以初步寻求卵母细胞感染HBV的可能性和机制，从而推动HBV经卵细胞垂直传播的进一步研究。   3创造性与先进性   3.1在理论上，打破了传染病不遗传的传统认识；   3.2在国际上首次发现在不同发育阶段的卵细胞均检测到HBcAg和HBVDNA，首次在人类早期胚胎中检测出HBVmRNA，直接证实HBV经卵细胞发生母婴垂直传播，并形成了清晰的感染路线图；   3.3证实母亲血清中的HBVDNA水平是影响HBV经卵细胞传播的主要因素，同时发现胚胎感染HBV后，由于病毒的复制及代谢产物会影响胚胎的发育，甚至造成流产而阻断母婴传播的发生；   3.4成功建立颗粒细胞体外感染平台，更加接近HBV的自然感染过程，为后期继续进行相关研究奠定了基础；   3.5该项目是一个跨多学科的长期研究，因此研究思路、研究方法及研究成果也是一个多学科的结晶。   4应用情况   4.1理论价值   重要的理论价值在于:打破了以往传统的认识：传染病不遗传，遗传病不传染，从科学的角度证实了HBV可以通过生殖细胞（卵细胞）的感染（遗传）而传递至子代发生（感染）。   4.2相关临床及基础的应用价值   本课题组的研究结果运用于临床后，能为阻断HBV母婴垂直传播提供有力依据；在降低人群HBV感染率及不良结局发生方面起到不可低估的作用；为夫妻单方或双方存在HBV感染计划生育下一代的人群，在临床妊娠方面可全程给予科学指导，为进一步基础研究提供了较为系统的研究平台。   共发表论文11篇，被引用70余次。其中SCI论文5篇，被引用50多次；发表国内核心期刊6篇，其中1篇被Medline收录。研究成果受到同行专家的积极评价。此课题为国家和社会共培养博士研究生3名，硕士研究生3名。