1.任务来源：自选项目

2.应用领域和技术原理

急性早幼粒细胞白血病（APL）是AML的一个亚型，是急性白血病中病情十分凶险的一种类型。本实验是为了进一步研究PBK/TOPK在急性早幼粒白血病细胞增殖分化中的作用，明确其发病的分子机制。

3.性能指标：

1）先前的研究已经表明PBK/TOPK表达在造血系统恶性肿瘤中，我们实验发现PBK/TOPK在TPA诱导的HL-60白血病分化过程中表达，发现分化后的HL-60细胞，PBK/TOPK表达减少，而磷酸化的PBK/TOPK和磷酸化的p38少量增加，提示PBK/TOPK可能激活下游p38激酶而促进早幼粒细胞的分化。

2）为了进一步研究PBK/TOPK在急性早幼粒白血病细胞增殖中的作用，明确其发病的分子机制，采用HL-60和NB4细胞系，敲减PBK/TOPK导致Nrf2表达减少，同时，减少Nrf2的活性可增加ROS产生，有助于ROS水平增高和线粒体凋亡路径活化。另一方面，Nrf2下调可以减少cdc2和cyclinB表达，导致G2/M期细胞周期阻滞。 PBK/TOPK也许可以稳定Nrf2，严格调控ROS水平，促进细胞周期进展，抑制细胞凋亡，促进早幼粒细胞增生。我们的结果阐明了PBK/TOPK介导早幼粒细胞增殖的分子机制，为AML的发病奠定理论基础。 

4国内外同类技术比较

国内研究：PBK/TOPK是一种新发现的丝-苏氨酸激酶，属于MAPKK分子家族。经检索,继本研究之后，同实验室的何芙蓉博士用免疫组化法和基因芯片研究了PBK/TOPK在少数正常组织特定细胞中的明确表达及其在多种恶性肿瘤细胞的强阳性表达,为其成为研究肿瘤起源与发生的标志物提供了依据。

国外研究表明：在过去的十年，研究者发现PBK/TOPK表达在造血系统肿瘤：如白血病、淋巴瘤和骨髓瘤，并且和这些肿瘤的恶性度相关。本课题深入研究PBK/TOPK调控急性早幼粒细胞白血病的增殖机制，首次得出Nrf2是介导PBK/TOPK促细胞增殖的关键因子。

5．成果的创造性

1.PBK/TOPK是新发现的MAPKK信号转导路上的分子，首次揭示了参与了HL-60细胞的分化，国内尚未报道；

2.在国内外同行领域揭示了证实了Nrf2是介导PBK/TOPK促细胞增殖的关键因子，通过增加cdc2和cyclin B 蛋白的表达和诱导线粒体功能活化和抑制ROS产生使细胞周期阻滞、凋亡受阻，为寻找APL的发病机制的靶点奠定理论基础。

6. 作用意义：陕北血液病高发，我们深入APL发病机制研究，为AML的靶向治疗奠定理论基础。

7. 推广范围：PBK/TOPK不仅参与HL-60细胞的分化，而且通过Nrf2介导早幼粒细胞增殖。下调核因子Nrf2有助于PBK/TOPK诱导的G2/M细胞周期阻滞和凋亡，最终抑制细胞增殖，为AML的靶向治疗奠定理论基础。

存在问题：慢病毒转染的效率较低。

改进措施：可以适当降低转染时细胞的密度（60-70%）；取最佳细胞的生长状态；接种后24h内进行转染。